Chromatographie liquide haute performance (HPLC)

Bien que l’électrophoresis bidimensionnel de gel (2-DE) soit une méthode couramment utilisée pour analyser le protéome entier, elle a des limitations telles que la capacité limitée de séparation, l’effet discriminatoire, et les procédures d’opération compliquées. Il est souvent difficile d’obtenir des résultats satisfaisants pour l’analyse de la grande plage dynamique, de la faible abondance et des protéines hydrophobes. Chong et coll. ont utilisé la spectrométrie HPLC/mass pour comparer et analyser l’expression différentielle des protéines pré-malignes et cancéreuses. La protéine a été séparée par HPLC, et les fractions recueillies ont été identifiées par MALDI-TOF-MS, de sorte que la protéine a été quantitativement analysée dans l’expression différentielle des deux types de cellules. En tant que nouveau type de technologie de séparation, la chromatographie liquide multidimensionnelle n’a pas la limitation de la masse moléculaire relative et du point isoélectrique. Grâce à la combinaison de différents modes, il élimine l’effet discriminatoire de l’électrophorèse gel bidimensionnel. Il a les caractéristiques d’une grande capacité de pointe et d’une automatisation facile. La chromatographie bidimensionnelle de phase d’échange-inverse d’ion (2D-IEC-RPLC) est le système de séparation de chromatographie liquide multidimensionnel le plus couramment utilisé dans la recherche protéomique.